Технология рекомбинатных ДНК
Важнейшим достижением последних лет стало внедрение метода генетической инженерии, или, точнее, технологии рекомбинантных ДНК. Эти методы заключаются в формировании отдельных участков ДНК человека, содержащие отдельные гены или их определенные последовательности. С этой целью используют ферменты, называемые рестриктазы. Они последовательно расщепляют ДНК на отдельные участки. Например, фермент Eco RI (фермент расщепления) отделяет G от А в последовательности - GAATTC - таким образом образуя “липкие” концы, которые так называются потому, что они связываются с подобными последовательностями, производимыми этим же ферментом на ДНК с соответствующим вектором:
Вектор, на котором происходит соединение участков, как правило представляет собой плазмиду - маленькое кольцо ДНК. Это рекомбинантная часть процесса. Далее вектор попадает к микроорганизму, преимущественно в Escherichia coli, из которого развивается культура, формирующая клоны с большим количеством копий ДНК человека. Клонированную ДНК можно обозначить с помощью 32 Р, а потом ее использовать как пробу.
Проба - это обозначеный однониточный фрагмент ДНК, который будет скрещиваться, и вследствие этого указывать и размещать (путем ауторадиографии) комплементарные последовательности среди фрагментов ДНК на Саузерн блоттинг. Этот процесс - это перенос фрагментов ДНК, были отделены с помощью электрофореза от геля агарозы на нитроцеллюлозных фильтров, где они способны скрещиваться с пробой (слияние двух однонитковых ДНК путем объединения соответствующих оснований).
ПРИМЕНЕНИЕ В МЕДИЦИНЕ.
Описанные методы широко применяются в медицине. Особое значение имеет синтез биологически важных молекул (инсулин человека, гормон роста, факторы свертывающей крови) и диагностика генетических заболеваний. Последняя возможна благодаря проведению генного анализа, которая заключается в исследовании клонированной и помеченной последовательности ДНК, соотносится с частью гена, отвечающего за возникновение того или иного расстройства. Эта метод проиллюстрирован относительно антенатальной диагностики гемоглобинозива.
